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欧宝体育娱乐平台:单细胞组织解离的详细实验方法---子宫内膜单细胞悬液制备

发表时间: 2022-08-13 06:51:35 来源:欧宝体育首页APP 作者:欧宝体育app客户端


  从新鲜组织中制备高活性和高质量的单细胞悬液是单细胞转录组测序(scRNA-seq)至关重要的一步,很多单细胞实验折戟在此。常见的问题诸如细胞活性低,细胞背景不干净,细胞碎片多,细胞结团率高等。

  样本制备成为限制单细胞技术广泛应用的一大障碍,也是科研服务公司和广大科研工作者面临的主要难题。

  子宫内膜由单层柱状上皮和固有层组成。上皮由纤毛细胞和分泌细胞构成,但分泌细胞多于纤毛细胞。固有层很厚,由疏松结缔组织构成,含有较多网状纤维、巨噬细胞、淋巴细胞和浆细胞,丰富的血管、淋巴管和神经,此外,还有大量分化程度较低的梭形或星形细胞,称基质细胞。基质细胞核大而圆,胞质较少,可随妊娠与月经周期变化而增生分化。本实验中用到的酶包括透明质酸酶、胶原蛋白酶Ⅳ和脱氧核糖核酸酶I。

  3. 使用100μm细胞过滤器过滤细胞悬液,去除组织,用10mLDMEM/FBS冲洗过滤器(这个步骤非常重要),600g离心5分钟,用100μLDMEM/FBS重悬细胞后放置在冰上。

  8. 步骤6中的组织消化后按步骤5,收集细胞过滤液,离心并用DMEM/FBS重悬后放置在冰上。组织则继续加入10mL细胞消化液消化,条件不变。

  22. 通过细胞计数仪检测细胞活性大于等于85%,背景干净,结团率小于5%,细胞量大于等于5万;可用于后续单细胞测序建库实验。

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